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    做大鼠ELISA試劑盒的經(jīng)驗(yàn)總結(jié)

    發(fā)布時(shí)間: 2015-11-19  點(diǎn)擊次數(shù): 1666次

        本人在剛開始做大鼠ELISA試劑盒時(shí)就面臨很多困難,雖然有師兄師姐鋪路,但還是常常做得一塌糊涂,比如說(shuō)花板,假陽(yáng)性,全顯色,全部顯色,顯色比空白還低。。。。。。自己也為此苦惱過(guò)很長(zhǎng)一段時(shí)間,隨著自己技術(shù)水平得提高,或多或少地也掌握了ELISA體系的脾氣,也是熟能生巧吧,現(xiàn)在做方陣,做ELISA已是輕車熟路了,以前檢測(cè)一種抗體用整整一下午還算得暈暈的,現(xiàn)在給我十個(gè)八個(gè)的從包被到顯色,一個(gè)工作日基本搞定。

    下面就由我拋磚引玉地來(lái)說(shuō)一下:

    1.正式試驗(yàn)時(shí),應(yīng)分別以陽(yáng)性對(duì)照與陰性對(duì)照控制試驗(yàn)條件,待檢樣品應(yīng)作一式二份,以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。有時(shí)本底較高,說(shuō)明有非特異性反應(yīng),可采用羊血清、大鼠ELISA試劑盒兔血清或BSA等封閉。

    2.在ELISA中,進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的選擇是很重要的,其中包括:

    (1)固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進(jìn)行篩選:用等量抗原包被,在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng),觀察其顯色反應(yīng)是否均一性,據(jù)此判明其吸附性能是否良好。

    (2)包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時(shí),要求純度要好,吸附時(shí)一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時(shí)間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18~24小時(shí)。大鼠ELISA試劑盒蛋白質(zhì)包被的zui適濃度需進(jìn)行滴定:即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進(jìn)行包被后,在其它試驗(yàn)條件相同時(shí),觀察陽(yáng)性標(biāo)本的OD值。選擇OD值z(mì)ui大而蛋白量zui少的濃度。對(duì)于多數(shù)蛋白質(zhì)來(lái)說(shuō)通常為1~10μg/ml。

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